Descrizione della tecnica PCR
(reazione a catena della polimerasi:polymerase chain reaction)
1-permette di ottenere in breve tempo(ore,giorni) grandi
quantità
di duplicati di frammenti di DNA utilizzando poche copie
iniziali
2-materiale necessario:
-frammento di DNA da duplicare (stampo,template:circa 2000
nucleotidi)
-sequenze di nucleotidi complementari delle zone adiacenti
alle
estremità del DNA da duplicare (inneschi o primers:circa 20
nucleotidi)
-nucleotidi per la sintesi della catena di DNA
-enzima DNA polimerasi per la sintesi delle catene di DNA
3-fasi operative:
-separazione delle due catene del DNA mediante riscaldamento
per circa 1 minuto a 95°C
-aggiunta degli inneschi o primers e loro unione alle sequenze
complementari nel DNA alla temperatura di circa 60°C per 1
minuto
-aggiunta dell'enzima DNA polimerasi e dei nucleotidi alla
temperatura
di circa 72°C per tempo variabile in funzione della lunghezza
del
DNA da sintetizzare:si formano due catene di DNA simile alla
iniziale
-si ripetono le fasi precedenti sulle catene
ottenute,ottenendo la
sintesi di altre due catene:totale quattro
-si ripetono le fasi precedenti più volte ottenendo cosi' un
numero
rapidamente crescente di DNA duplicati
nota:mescolando catene semplici di nucleotidi con DNA polimerasi
e
nucleotidi,non si realizza la sintesi delle nuove
catene:questa
viene invece facilitata dalla presenza di porzioni di
doppia
catena ottenute con la unione dei primers alle estremità
delle
catene che servono come stampo.
vedi sito
Inviato da: fumarinox
il 01/03/2023 alle 20:47
Inviato da: marabertow
il 24/02/2023 alle 20:59
Inviato da: cassetta2
il 20/12/2020 alle 16:11
Inviato da: cassetta2
il 12/10/2020 alle 10:01
Inviato da: cassetta2
il 05/08/2019 alle 20:30