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Il dipinto, realizzato nel 1599,è conservato alla Galleria nazionale di arte antica di Roma.
Il quadro rappresenta l'episodio biblico della decapitazione del re assiro Oloferne da parte della vedova ebraica Giuditta,che voleva salvare il proprio popolo dalla dominazione straniera.
Si dice che Caravaggio abbia dipinto il quadro pensando alla storia di  Beatrice Cenci, che, insieme alla madre e al fratello,uccisero il padre padrone,dopo averlo addormentato con l'oppio.