Descrizione della tecnica PCR (reazione a catena della polimerasi:polymerase chain reaction)1-permette di ottenere in breve tempo(ore,giorni) grandi quantità di duplicati di frammenti di DNA utilizzando poche copie iniziali2-materiale necessario: -frammento di DNA da duplicare (stampo,template:circa 2000 nucleotidi) -sequenze di nucleotidi complementari delle zone adiacenti alle estremità del DNA da duplicare (inneschi o primers:circa 20 nucleotidi) -nucleotidi per la sintesi della catena di DNA -enzima DNA polimerasi per la sintesi delle catene di DNA3-fasi operative: -separazione delle due catene del DNA mediante riscaldamento per circa 1 minuto a 95°C -aggiunta degli inneschi o primers e loro unione alle sequenze complementari nel DNA alla temperatura di circa 60°C per 1 minuto -aggiunta dell'enzima DNA polimerasi e dei nucleotidi alla temperatura di circa 72°C per tempo variabile in funzione della lunghezza del DNA da sintetizzare:si formano due catene di DNA simile alla iniziale -si ripetono le fasi precedenti sulle catene ottenute,ottenendo la sintesi di altre due catene:totale quattro -si ripetono le fasi precedenti più volte ottenendo cosi' un numero rapidamente crescente di DNA duplicatinota:mescolando catene semplici di nucleotidi con DNA polimerasi e nucleotidi,non si realizza la sintesi delle nuove catene:questa viene invece facilitata dalla presenza di porzioni di doppia catena ottenute con la unione dei primers alle estremità delle catene che servono come stampo.vedi sito
polimerasi PCR
Descrizione della tecnica PCR (reazione a catena della polimerasi:polymerase chain reaction)1-permette di ottenere in breve tempo(ore,giorni) grandi quantità di duplicati di frammenti di DNA utilizzando poche copie iniziali2-materiale necessario: -frammento di DNA da duplicare (stampo,template:circa 2000 nucleotidi) -sequenze di nucleotidi complementari delle zone adiacenti alle estremità del DNA da duplicare (inneschi o primers:circa 20 nucleotidi) -nucleotidi per la sintesi della catena di DNA -enzima DNA polimerasi per la sintesi delle catene di DNA3-fasi operative: -separazione delle due catene del DNA mediante riscaldamento per circa 1 minuto a 95°C -aggiunta degli inneschi o primers e loro unione alle sequenze complementari nel DNA alla temperatura di circa 60°C per 1 minuto -aggiunta dell'enzima DNA polimerasi e dei nucleotidi alla temperatura di circa 72°C per tempo variabile in funzione della lunghezza del DNA da sintetizzare:si formano due catene di DNA simile alla iniziale -si ripetono le fasi precedenti sulle catene ottenute,ottenendo la sintesi di altre due catene:totale quattro -si ripetono le fasi precedenti più volte ottenendo cosi' un numero rapidamente crescente di DNA duplicatinota:mescolando catene semplici di nucleotidi con DNA polimerasi e nucleotidi,non si realizza la sintesi delle nuove catene:questa viene invece facilitata dalla presenza di porzioni di doppia catena ottenute con la unione dei primers alle estremità delle catene che servono come stampo.vedi sito