GANGAKU

SPECIFICHE SULLA TECNICA

Il primo passo di tali tecniche di manipolazione dei geni è stato

certamente la scoperta degli  ENZIMI  DI RESTRINZIONE, Il processo

avviene in varie fasi:
-estrazione di DNA da cellule eucariote e procariote;
-frammentazione delle molecole di DNA in segmenti più corti;
-identificazione e separazione dei diversi frammenti isolati in cellule

ospiti, spesso diverse dalle cellule da cui proviene il DNA isolato.
Le cellule ospiti con genoma manipolato possono esprimere i geni

estranei, possono anche riprodursi e fungere da sistemi di amplificazione

 del gene stesso.
Per estrarre il DNA bisogna rompere le cellule trattandole con sostanze

litiche e detergenti. Le molecole di DNA, separate dalla miscela di cellule

con tecniche purificanti, vengono tagliate in frammenti più piccoli.

Per effettuare ciò si utilizzano enzimi di restrizione o endonucleasi di

 restrizione. Esse non tagliano la doppia elica a caso, bensì agiscono

in sequenze bersaglio di nucleotidi creando delle estremità

appiccicose/coesive (che contengono delle sequenze palindrome).

Il taglio avviene mediante idrolisi. Si ottengono un numero variabile

di filamenti di DNA di lunghezza variabile, legato alla presenza di

sequenze bersaglio che si trovano nei plasmidi. I frammenti di DNA

plasmidico e quelli di DNA eucariotico vengono legati insieme grazie

 alle sequenze coesive con l’intervento di DNA ligasi.

I suddetti enzimi di restrizione associati ad una classe di molecole note come ligasi, costituiscono il primo vero kit delle tecnologie del  DNA ricombinante Tale espressione è spesso usata per intendere le varie tecniche utilizzate dall'ingegneria genetica.